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(Stain-Free) の定量性比較 HKP と総タンパク質
代表的な 3 種類のハウスキーピングタンパク質 (β -actin、 β -tublin、 と Stain-Free ゲルを用いた総タンパク質の定量性について比較し GAPDH) た結果を示します。
Relative signal intensity of protein bands
ライセートローディング量 (µg)
50 40 30 20 10 β-actin 50
ライセートローディング量 (µg)
40 30 20 10
6 5 4 3 2 1 0 0
Stain-Free β-actin GAPDH β-tubulin Quantitative response
β-tubulin
GAPDH
総タンパク質 (Stain‑Free)
10
20 30 40 HeLa lysate load, µg
50
60
検出画像 (上) HKP (β‑actin,β‑tublin,GAPDH) (左) 総タンパク質 (Stain‑Free)
HKPと総タンパク質の数値比較例
(10 µg/ウェルの強度を1とした場合の各濃度における強度の比率)
HKPではタンパク質の濃度を数値化することが困難であるのに対し、 総タンパク質 (Stain‑Free) はタンパク質濃度を反映した定量結果が 得られることが示されています。 特にHKPの多くは過剰発現している ことが多く、 今回の結果のように本来のタンパク質量を反映した数 値結果を得ることが難しいことがよく あります。
(Stain-Free) のデータ補正後の定量比較 HKP と総タンパク質
(β -actin) と総タンパク質 (Stain-Free) によりデータ補正を行い、 定量比較を行った結果 MEK、Akt、Erk の発現量をハウスキーピングタンパク質 を示します。
ライセートローディング量 (µg)
50 40 30 20 10
ライセートローディング量 (µg)
50 β-actin 40 30 20 10
Signal intensity (arti cial units)
2.5 2 1.5 1 0.5 0
■ MEK ■ Akt ■ Erk
HKP (β‑actin)
総タンパク質 (Stain‑Free)
Expected Value
MEK Akt
総タンパク質 (Stain‑Free)
Erk
10
40 HeLa lysate load, µg
40
MEK、 Akt、 ErkをHKPおよび総タンパク質によりデータ補正した結果
(10 µg/ウェルの補正値を1とした場合の40 µg/ウェルにおける補正値の比較)
検出画像 (上) MEK,Akt,Erk,HKP (β‑actin) (左) 総タンパク質 (Stain‑Free)
左のウェスタンブロッティングの結果をもとに、 実際にHKP (β‑actin) 、 お よび総タンパク質 (Stain‑Free) を用いターゲッ トタンパク質 (MEK, Akt, Erk) のデータ補正を行った一例です。 データ補正を行った結果、 10 µg/ ウェルを1とした場合、 HKPでは40 µg/ウェルにおいて期待値 (‑‑‑Expected Value) の2倍ほど高い値が示されました。 それに対し、 総タンパク質では期 待値に近い値で算出され、 より適切に補正されていることが示されました。
Ordering Information
必要な試薬類をまとめたパッケージをご用意いたしました。 Stain-Free 定量ウェスタンブロッティングを始めるにあたり、 個別にご購入いただくよりお求めやすくなっております。 ミニプロティアン TGX Stain-Free ゲルの各種ゲル濃度および 12 もしくは 15 ウェルタイプから選択することが可能です。 価格
Stain-Freeウェスタン スターターパック※
構成品 (10 枚) ■以下のいずれかのミニプロティアン TGX Stain-Free プレキャストゲル ※※ (7 × 8.5 cm, 10 セット) ■低蛍光 PVDF メンブレン / フィルターペーパーセット ※※※ ■プレシジョン Plus スタンダード (未着色タイプ) 1000 µl ■プレシジョン Plus ブルースタンダード (着色済タイプ) 500 µl ※※※
¥60,000
12well 15well
7.5% 4568025J1 4568026J1
10% 4568035J1 4568036J1
12% 4568045J1 4568046J1
4-15% 4568085J1 4568086J1
4-20% 4568095J1 4568096J1
8-16% 4568105J1 4568106J1
AnyKD 4568125J1 4568126J1
※ 本パックを用いた電気泳動には別途ミニプロティアンTetraセルが必要です。 ※※ 中厚タイプ(0.84 mm厚)のフィルターペーパーが付属します。 ※※※ プレシジョンPlusスタンダードとブルースタンダードを1:1で混合してゲルにアプライすることでStain-Free検出と目視の両方でバンドを確認できます。
Bio-Rad Laboratories
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