電気泳動ウェスタンイメージャーカタログ_リンク削除
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- 関連試薬
高感度検出のカギを握るブロッキングバッファー
ブロッキングバッファー
転写後のメンブレンは抗原抗体反応を行う前に、抗体 のメンブレンへの非特異的結合を抑えるためにブロッ キングを行います。下表に示されたタンパク質や界面 活性剤が一般的に用いられますが、 メンブレンや使用 抗体との反応性によって、 ブロッキング剤を選択するこ とが大変重要です。 バイオ・ ラッ ドではウェスタンブロッティングに用いられ る各種ブロッキング剤をラインアップしており、中でも EveryBlot ブロッキングバッファーは様々な条件下で 利用でき、 わずか 5 分間でブロッキング可能な優れた 特性をもつブロッキングバッファーです。
表 ブロッキング剤の種類と特性
ブロッキング剤 メンブレン カゼイン ゼラチン ニトロセルロース 推奨濃度 補足 プレミックスバッファーあり リン酸化タンパク質検出には不適
PVDF
1%
ニトロセルロース ニトロセルロース ニトロセルロース
Tween 20 EveryBlot
ブロッキング バッファー
溶解するために加熱が必要 1-3% 0.05-0.3% いくつかの種類のタンパク質に有効 ー のブロッキング可能 短時間 (5 分) 低蛍光 PVDF にも推奨
PVDF
低蛍光 PVDF
低バッ クグラウンドと高速ブロッキングを実現 EveryBlot ブロッキングバッファー
◆ブロッキング時間はわずか 5 分 ◆低バックグランド化による高感度検出 ◆リン酸化タンパク質の検出に対応 ◆蛍光検出にも推奨
化学発光検出例
RNA Helicase A p53 PRDX 3 ミルク (ブロッキング時間 EveryBlot - A five minute blocking buffer for ALL western blots. No compromises.
蛍光検出例
RNA Helicase A (DyLight 800) ALIX (StarBright B 700) Tubulin (hFAB Rhodamine)
30 min)
EveryBlot ブロッキングバッファー (ブロッキング時間 5 min)
HEK239 細胞に含まれる 3 種類のタンパク質を化学発光により
検出し、 比較した例
他社製蛍光ウェスタン用 ブロッキングバッファー (ブロッキング時間 60 min)
EveryBlot ブロッキングバッファー (ブロッキング時間 5 min)
HEK239 細胞に含まれる 3 種類のタンパク質を蛍光により
検出し、 比較した例
リン酸化タンパク質の検出例
Calyculin A
− +
様々な蛍光波長におけるバッ クグラウンド比較例
EGF
− +
EGF
−
+ Relative background
6.0 4.0 2.0 0.0 1.0 1.0
■ 他社製 蛍光ウェスタンブロッティング用 ブロッキングバッファー ■ EveryBlot ブロッキングバッファー 4.3 3.7 2.9 1.0 2.8 1.0 1.7 1.0
Total AKT2 AKT2 pSer474 Jurkat細胞におけるCalyculin A 処理 (+) 、 未処理 (-) によるAKT2 (pSer474) のリン酸化検出
Total EGFR EGFR pTyr845 A431細胞におけるEGF処理 (+) 、 未処理 (-) によるEGFR (pTyr845) のリン酸化検出
Total EGFR EGFR pSer1047 A431細胞におけるEGF処理 (+) 、未処理 (-) によるEGFR (pSer1047) のリン酸化検出
Ex/Em:
Blue 470 nm/532 nm
Green 532 nm/595 nm
Red 637 nm/700 nm
Far red 662 nm/715 nm
Near infrared 766 nm/836 nm
メンブレンを 2 種類のブロッキング剤で処理した後、 様々な蛍光波長で検出した際のメンブレンの 自家蛍光を比較した例 (使用メンブレン 低蛍光 PVDF メンブレン)
Ordering Information
カタログ番号 品名 容量 価格 保存 ブロッキングバッファーおよびブロッキング剤
12010020 12010947 1610782 1706537 1610781 1610781B02 1706531
関連製品
EveryBlot ブロッキングバッファー EveryBlot ブロッキングバッファー 1 x TBS / 1% カゼイン EIA グレードゼラチン 10% Tween 20 10% Tween 20 EIA グレード Tween 20 10x TBS 10x TBS 10x PBS 10x PBS
転写バッファー 洗浄バッファー &ブロッカー 10x トリス / グリシン (1 L) ※ 〇 〇 〇 〇 〇 発光基質
500 ml 50 ml 1L 200 g 1L 1L×2 100 ml 1L 1L×2 1L 1L×2
¥29,000 ¥4,500 ¥28,000 ¥25,000 ¥9,000 ¥15,000 ¥8,500 ¥8,000 ¥12,000 ¥16,000 ¥28,000
4℃ 4℃ 4℃
室温 室温 室温 室温 室温※ 室温※ 室温※ 室温※
1706435 1706435B02 1610780 1610780B02
※長期保存する場合には、 開封は室温に戻してから行ってください 4℃にて保管していただくことをお勧めいたします。
カタログ番号 関連キット
品名 ウェスタンブロッティングバッファーキット I ウェスタンブロッティングバッファーキット II ウェスタンブロッティングバッファーキット III ウェスタンブロッティングバッファーキット IV
2 次抗体
※※ 〇 〇
Clarity(200 ml) ClarityMax(100 ml)
〇 〇 〇
価格
単品購入時 合計金額
保存
12010020J1 12010020J2 12010020J3 12010020J4
¥159,000 ¥154,000 ¥95,000 ¥41,000
¥174,000 -20℃ ¥166,500 -20℃ ¥102,500 4℃ ¥44,500 4℃
※ EverBlot ブロッキングバッファー(500 ml) 、 (1 L) 、 (1 L) が含まれます。 10xTBS 10% Tween 20 (H+L) 、 ヤギ抗マウス IgG (H+L) 各 2ml が含まれます。 ※※ HRP 標識ヤギ抗ウサギ IgG
Bio-Rad Laboratories
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